western blot

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  • 膜蛋白提取的问题

    智能科研狗 发布于:2016.09.10

    三缄其口:请教一下,我的目的蛋白是膜蛋白,之前试过直接加裂解液+细胞刮提蛋白,但western一直没结果,所以想重新提蛋白,请问各位关于提取膜蛋白的好建议吗?


    麦兜在路上:有试剂盒,找找


    三缄其口:碧云天的好用吗?


    可乐:我们实验室用的是碧云天的,感觉还行


    三缄其口:是用来提膜蛋白的那款吗?


    可乐:我们用的是碧云天的一抗


    熊XX:


    三缄其口:@熊XX 请问你养的是悬浮细胞吗?


    熊XX:不是,293T,你可以借鉴下,我师姐之前做的,有时候提的好,有时候提不好。


    三缄其口:那你当时是用胰酶手机细胞的吗?


    熊XX:不是,直接吹打,293T贴壁不牢


    三缄其口:加PBS后直接吹打?


    熊XX:不是,培养基,直接吹打收集


    三缄其口:培养基里面加了蛋白酶抑制剂吗?


    熊XX:没有加。然后再加裂解液和PI和CAA裂解。


    三缄其口:我有一点没懂:内个、加了培养基吹打下了细胞,是用PBS再清洗培养瓶吗?


    熊XX:我是12孔板上面这样做的,因为孔比较小,我们都是用细胞刮

     
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