western blot

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  • 求帮助~有人做过MMP-2 western blotting吗

    智能科研狗 发布于:2016.09.04

    冰淇淋:我的MMP-2条带,在100-135有条带,在67/72没有目的条带,100-135之间的条带可能是二聚体吗?


    慌慌:MMP2本身条带是多大?抗体说明书上给出的位置又是多少?


    冰淇淋:说明书上写的是64/72的位置


    慌慌:样品里面有没有阳性对照


    冰淇淋:没有


    科研狗:做western blot之前首先要确定抗体是不是好使,所以一般来说你需要有MMP2的带有标签的质粒,在细胞中表达之后做好阴性对照,用标签抗体去看位置,同时用你的MMP2抗体去对照看。你这样品里面确定有MMP2? 没有对照你能确定那一条是你的目的条带? 100-135之间的很可能就是杂带


    慌慌:100多kD位置也可能是杂带,最好加一个确定表达MMP2的样品,以此来确定目的条带位置


    冰淇淋:哦哦,用这个MMP-2做过其他的细胞株,也都是这样。


    慌慌:做wb的时候,一定要先确定你要的目的条带是哪条


    冰淇淋:是有的时候和说明书上说的不一定一致吗


    慌慌:是有不一致的,也不至于差这么多


    冰淇淋:之前MMP-9也是,说明书是84/72.但是网上说130位置也可以代表,因为130是MMP_9和一个小分子的结合体。MMP-2没查到,所以不知道MMP_2会不会也可能这样


     
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