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  • 用live or die染料区分死活菌中用荧光显微镜观察问题

    智能科研狗 发布于:2016.09.12

    韩乔:我用live or die染料染细菌 来区分死活菌  但是用荧光显微镜和共聚焦显微镜观察不管是活菌还是死菌都有这两种颜色  不知道是怎么回事


    A张毅:我觉得你用荧光显微镜就可以了,激光共聚焦有可能是你染的原料不对,有可能是洗脱的不好。


    韩乔:之前是我一个同学一直在做  但是老是出现这种情况  现在我也需要用到这个  但是 还是没解决这个问题  不知道是染料的问题 还是仪器使用上的不规范


    丽江阿镇:可能染色染过了,你是多聚甲醛固定细胞吗?


    卓凯悦:我说实话,你自己表述的意思。我们当时实验室有人用DAPI染料染噬菌体,观察它的颜色,是在荧光显微镜下面看的。我不太明白你的live or die染料染到细菌上是不是live状态下面是一种颜色,die是另外一种颜色?


    丽江阿镇:缩短一抗二抗时间,尤其是二抗,不能太久


    韩乔:对的,死菌显示红色,活菌显示绿色。染色时间不能太久?


    A张毅:调整一下染色时间,有可能是二抗问题,非特异性结合。


    卓凯悦:也就是说现在不是荧光显微镜和激光共聚焦的问题,而是操作步骤的问题。


    韩乔:那个染料分别是PI染料和syto9 我见好多文献中都可以是用这个做的  我再看看  


    丽江阿镇:对,特别就是二抗,你可以试试半小时


    韩乔:我就染了十五分钟呢,书上说的就是15min


    A张毅:那你洗脱呢,洗脱了几次?


    韩乔:洗脱了两次

     
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