PCR

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  • PCR 10ul体系拿出来是不是要稀释10倍才能用?

    智能科研狗 发布于:2016.09.13

    LM:PCR 10ul体系拿出来是不是要稀释10倍才能用?


    wb-慌慌:如果含量不是太高,不稀释也可以的


    LM:RNA都是500ug然后逆转录的,浓度怎样?


    wb-慌慌:我是根据试剂盒说明书,一般用1.5ug或者2ug.cDNA没有再测浓度


    LM:用2ug的话肯定得稀释了啊?还有复孔呢


    熊XX:本来只有10ul


    wb-慌慌:用2ug反转,得到cDNA 不用稀释,然后进行qPCR。我用的是20ul的体系,如果做的基因多,可以多反转录几管


    金成一:哇~~你们做qPCR的cDNA用量这么大的啊我们都用的1ug转录,总量10ul,然后再稀释10倍,用其中3-5ul(具体视情况)来qPCR。是不是机器不一样或者用的试剂不一样导致用量差别那么大的?


    LM:上面的和我的差不多,学姐稀释20倍,我昨天没稀释


    金成一:研究室老师以前教的时候说qPCR的时候要保证那个斜率(我忘了那个陡坡急速上升的区域的切线值的叫法,哈哈)好像处于20到30 cycle之间(具体得回去确认下),所得的结果才比较准确,因为处于这个cycle区间,整个qPCR的曲线图才完整,可能各个研究室自己制订的设计不太一样吧,感觉差别有点大@LM 

     
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